77 미토콘드리아 주석이 있는 모든 단백질 중 97%는 미토콘드리아 기질 또는 미토콘드리아 내막 주석을 가지고 있었습니다( 그림 6F ). 이 결과는 NP 기반 PL이 높은 공간적 특이성을 가지며 NP-A 라디칼이 막횡단 표지를 최소화함을 나타냅니다. 예상대로 미토콘드리아 기질에 노출되지 않은 거의 모든 전자 전달 사슬 단백질은 프로테옴 I 또는 프로테옴 II에서 검출되지 않았습니다( 그림 6G , 표 S1 ). 한 가지 예외는 구조 연구를 기반으로 미토콘드리아 기질에 노출되지 않을 것으로 예상되는 복합체 III 소단위 H였습니다 .78 , 79 흥미롭게도, 이 단백질은 이전에 PL 광촉매 miniSOG를 사용한 미토콘드리아 기질 프로테옴에서 검출된 바 있습니다. 80 이전에 PL 방법론을 사용하여 결정된 미토콘드리아 기질 단백질체와 비교했을 때, 7 , 80 우리의 단백질체는 미토콘드리아 기질에 노출되었을 때 전자 전달 사슬 단백질의 더 높은 커버리지를 나타냈습니다( 표 S1 ).
논의
APEX2-BP 시스템은 높은 시간 해상도를 갖는 PL에 널리 사용되어 왔지만, 비오틴 페녹시 라디칼의 확산으로 인해 공간 해상도가 제한됩니다. 29 , 30 APEX2 표지 반경을 조절하는 한 가지 방법은 BP를 반응성이 더 높은 라디칼에 해당하는 페놀로 대체하는 것이지만, 7 , 12 기존의 PL 효소(예: APEX2 및 HRP)는 이러한 기질을 산화시킬 수 없기 때문에 높은 산화환원 전위를 가진 페놀을 사용할 수 없었습니다.